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操作Hamilton 陽(yáng)離子交換柱純化蛋白常見問題

更新時(shí)間:2016-10-28

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采用Hamilton 陽(yáng)離子交換柱純化蛋白時(shí),洗脫采用的離子強(qiáng)度的大小范圍應(yīng)該如何確定,可以根據(jù)什么來調(diào)整洗脫時(shí)的離子強(qiáng)度?
Hamilton 陽(yáng)離子交換柱離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團(tuán)(活性基團(tuán))對(duì)各種離子的親和力不一樣人達(dá)到分離的目的的一種分離技術(shù)。離子交換劑是含有若干活性基團(tuán)的不溶性物質(zhì),即在不溶性母體上引入若干可解離基團(tuán)而成,根據(jù)引入解離基團(tuán)的不同,可以分為陽(yáng)離子交換劑和陰離子交換劑。各種離子對(duì)離子交換劑的親和力各不相同,親和力隨離子的價(jià)數(shù)與原子序數(shù)增加而增加,而隨離子水化膜半徑的增加而降低。對(duì)具體離子交換純化,需要主要離子交換劑的選擇和處理。洗脫不同蛋白的zui恰當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度液不一定一樣,通常采用濃度梯度和PH梯度相結(jié)合的方式洗脫,純化不同的蛋白先摸一摸洗脫液的離子濃度和PH值,其具體的離子濃度范圍可以很大,0.01mol/l到1mol/l,甚至3.0mol/l,PH值的范圍液很廣。
Hamilton 陽(yáng)離子交換柱因?yàn)榈鞍资峭ㄟ^靜電引力可逆的結(jié)合在離子交換樹脂上,要使蛋白與離子交換樹脂之間離子鍵打開,zui常用的方法就是加大反荷離子的濃度。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的,其強(qiáng)弱關(guān)系為: 陽(yáng)性競(jìng)爭(zhēng)離子:Ag+》CS+>K+>NH4+>Na+>H+>Li+ 陰性競(jìng)爭(zhēng)離子:I->NO3->(PO4)3->CN->HSO3->Mg2+>HCO3->HCOO->CH3COO->OH->F- 如果某種離子溶液洗脫效果不好,可用另一種親和力強(qiáng)的離子代替。
離子交換柱屬于弱離子交換劑,只有在一定的pH值范圍內(nèi),才能有離子交換能力。
 
 
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